ELISA: dekodowanie, metody

Wraz z rozwojem takich pokrewnych nauk, jak genetyka, biologia molekularna, chemia, a także rozwój postępu technicznego, nowoczesna medycyna może pochwalić się innowacyjnymi metodami diagnozowania różnych chorób człowieka. Wyróżniają się wysoką dokładnością wyników i bezpieczeństwem wykonania. Jednym z tych sposobów identyfikacji problemów zdrowotnych jest immunoenzymatyczny enzym. Zyskała popularność w ciągu ostatniej dekady i zyskała reputację wysoce skutecznej, niezawodnej i bezpiecznej dla pacjentów metody wykrywania chorób, nawet zanim pojawią się objawy zewnętrzne. Wyjaśnimy dokładnie, czym jest ten rodzaj diagnozy, jaka jest zasada jego działania, zwróć uwagę na zalety, zorientuj się w kosztach takiej analizy.

Reakcja organizmu na chorobotwórczą florę

Aby zrozumieć, w jaki sposób, dzięki enzymatycznemu testowi immunologicznemu, technicy laboratoryjni diagnozują różne choroby, konieczne jest zrozumienie procesu fizjologicznego, który zachodzi w organizmie podczas infekcji. Kiedy patogen wchodzi do krwioobiegu, ludzki układ odpornościowy wykazuje reakcję ochronną w postaci uwalniania pewnych substancji - przeciwciał. Wiążą się z komórką i analizują, czy jest ona częścią ciała, czy wcielona z zewnątrz. Jeśli układ odpornościowy ustalono, że komórka jest obca, a następnie ilość przeciwciał zaczyna wzrastać w celu zwalczania patogennego mikroorganizmu.

Przeciwciała są różnych typów, mają swoje własne cechy. Niektóre substancje pojawiają się bezpośrednio podczas okresu infekcji, inne pozostają przez całe życie w organizmie człowieka i to dzięki nim rozwijają silną odporność na określoną chorobę. Struktury białek są podzielone na takie gatunki: A, D, E, M, G. W medycynie przeciwciała nazywane są immunoglobulinami. Dlatego zwyczajowo określa się działanie tych substancji w łacińskich literach Ig.

Immunoassay analiza (ELISA) Opiera się na danych medycznych. Używając specjalnych antygenów w laboratorium, możesz określić obecność lub brak niektórych przeciwciał w materiale biologicznym. Zgodnie z wynikami tej analizy lekarz może postawić diagnozę, a także określić nie tylko obecność patologii, ale także czas jej powstania, aby określić poziom zagrożenia dla pacjenta. W teście immunoenzymatycznym częściej badana jest obecność przeciwciał z grup M i G.

Czym jest ELISA?

W rzeczywistości, immunoenzymatyczna immunologia nie jest innowacją współczesnego społeczeństwa. Został wymyślony w latach 80-tych. Ale do takich badań wymagało kłopotliwego kosztownego sprzętu. Dlatego ta metoda była stosowana tylko w specjalnie wyposażonych laboratoriach naukowych: była używana do pisania komórek i tkanek. Jednak w tamtym czasie nie było powszechnie stosowane w medycynie diagnostycznej, było technicznie trudne i niezwykle kosztowne w użyciu. Dopiero po opracowaniu technologii i wynalezieniu materiałów biopolimerowych poprawiła się metoda ELISA. Następnie metoda została spopularyzowana i zyskała zaufanie do kręgów medycznych.

Jak wspomniano powyżej, metoda ta obejmuje wykrywanie w biomateriałach - krwi, płynie owodniowym, ciele szklistym lub płynie mózgowo-rdzeniowym - pewne grupy immunoglobulin.

Istnieją badania, w których nie stosuje się antygenu do powierzchni i test immunoenzymatyczny związany z enzymem, który polega na przeprowadzeniu reakcji w specjalnych odwiertach. Ta ostatnia metoda ma większą czułość i niezawodność, w ten sposób jest analizowana w laboratoriach medycznych w celu wykrywania chorób ludzi.

Faza testu immunologicznego

W zależności od zamierzonej choroby, zestaw immunoenzymatyczny wykorzystuje niezbędny antygen, który podczas reakcji chemicznej w obecności infekcji skontaktuje się z patogenną florą. Proces ten nazywa się przeprowadzaniem odpowiedzi immunologicznej.

Następnie, aby wzrokowo ustalić wynik badania, należy przeprowadzić test ELISA enzymatycznej fazy. Polega na zabarwieniu materiału za pomocą specjalnych odczynników. W tym badaniu wykorzystuje się enzymy, takie jak alkaliczna fosfataza, peroksydaza i awidyna. W zależności od uzyskanego koloru w procesie przeprowadzania reakcji chemicznych i określenia wyniku testu immunoenzymatycznego.

Czym jest kolorymetria?

Analizę fazy enzymatycznej diagnozy przeprowadza się za pomocą metody o nazwie "kolorymetria". Faktem jest, że nie tylko kolor materiału podaje informacje o infekcji, ale także gęstość koloru wynikającą z reakcji chemicznych. Wskaźnik ten określa stężenie patogenu. Jeśli metoda ręcznej diagnostyki jest używana w staroświecki sposób, konstruuje się specjalny wykres kalibracji w celu określenia wskazanych wskaźników.

W nowoczesnych laboratoriach metoda ręczna jest dziś rzadko używana. Do analizy testu ELISA stosuje się specjalne urządzenie - kolorymetr, w którym tylko parametry badania są ustawiane ręcznie, a następnie urządzenie automatycznie wykonuje całą pracę, łącznie z wykreślaniem.

Metody ELISA

Istnieją bezpośrednie i pośrednie metody immunoenzymatycznego enzymu. Pierwszy typ zajmuje mniej czasu, ponieważ ma tylko 3 etapy realizacji. Po pierwsze, specyficzne przeciwciała są dodawane do antygenów badanego materiału, umieszczane w specjalnych odwiertach. Następnie usunąć ich nadmiar i przeprowadzić fazę enzymatyczną analizy, uzyskując w ten sposób wynik.

Metoda pośrednia jest stosowana znacznie częściej, ponieważ ma wyższą czułość w porównaniu z bezpośrednią metodą diagnozy. W trakcie przeprowadzania podwójnych badań stosuje się. Mianowicie - po pierwsze, antygen jest związany z nieznakowanym przeciwciałem, a następnie ze znakowanym. Ten proces zajmuje więcej czasu, ale wynik jest najbardziej dokładny.

Zestawy odczynników

Zestawy do testów immunologicznych są produkowane przez różnych producentów, w różnych poziomach wykończenia. W Rosji uznanym przedsiębiorstwem jest Unia Biomedyczna. Ten producent produkuje zestawy odczynników do badania metodą ELISA prawie wszystkich powszechnych infekcji w naszych szerokościach geograficznych, które można analizować w ten sposób. Oprócz samych odczynników zestawy zawierają dodatkowe materiały, co zapewnia bezpieczeństwo, wygodę i szybkość analizy. Ponadto substancje chemiczne są malowane w różnych kolorach, co zmniejsza prawdopodobieństwo błędów w wyborze laboratorium odczynników.

Zestawy chemiczno-biologiczne różnią się względną dostępnością, co bezpośrednio wpływa na dystrybucję i dostępność testu immunoenzymatycznego dla populacji.

Zalety metody diagnostycznej

Niewątpliwie immunoenzymatyczność enzymu ma kilka zalet w porównaniu z innymi metodami diagnostycznymi:

1. Przy jego pomocy można określić nawet niewielką obecność drobnoustrojów chorobotwórczych, co wskazuje na dużą czułość testu.
2. Możliwość wykrycia choroby na najwcześniejszych etapach, co znacznie zwiększa szansę na pomyślne wyleczenie.
3. Prostota i wygoda pobierania materiału biologicznego. Analiza ta jest przeprowadzana zarówno w prywatnych laboratoriach, jak i publicznie. W razie potrzeby pielęgniarka może pobrać materiał od pacjenta w domu.
4. Do analizy wymaga bardzo małej ilości biomateriału.
5. Szybkie wyniki. Nowoczesny sprzęt medyczny pozwala na przeprowadzanie analiz w ciągu jednego dnia.
6. Zdolność wykrywania ukrytych bezobjawowych form infekcji.
7. Badanie dostępności.
8. W razie potrzeby możliwe jest przeprowadzanie pomiarów masy przy użyciu tej metody.
9. Istnieje możliwość śledzenia przebiegu choroby i skuteczności przepisanego leczenia, ponieważ możliwe jest przeprowadzenie analizy ELISA, wielokrotnie całkowicie bezpiecznej dla pacjenta.
10. Automatyzacja etapów analizy, która eliminuje czynnik ludzki i zwiększa wiarygodność wyników.
11. Odczynniki do przeprowadzenia IFA są przechowywane wystarczająco długo - około roku.
12. Analiza jest możliwa przy wahaniach temperatury otoczenia.

Immunoglobuliny grupy M.

Przeciwciała grupy M są wytwarzane przez układ odpornościowy natychmiast po wykryciu obcego antygenu. W konsekwencji, jeśli test immunologiczny enzymu został zakończony przez wykrycie takich substancji w biomateriału, wskazuje to na ostry stan choroby, pierwotną infekcję. Immunoglobuliny grupy M mogą znajdować się w ciele przez okres do miesiąca w zależności od rodzaju infekcji. Następnie ich liczba zmniejsza się do całkowitego wygaśnięcia.

Immunoglobuliny grupy G.

Zastąpiony przez grupę immunoglobulinową M pojawia się struktura białkowa postaci G. Substancje te wytwarzają silną, w większości przypadków, odporność na całe życie. Określenie struktury białka IgG w badanym materiale wskazuje, że organizm wcześniej spotkał się z patogenem i ma reakcję ochronną przeciwko reinfekcji.

Wskazania do rozpoznania

Test immunoenzymatyczny służy do określenia różnych chorób zakaźnych, stanów hormonalnych i testów alergologicznych. Mianowicie:

• określić poziom hormonów tarczycy;
• wskaźniki rozrodczego panelu hormonalnego;
• Oncomarkers;
• wykrywa czynniki zakaźne, takie jak wirus cytomegalii, zapalenie wątroby, toksoplazmę, różyczkę, odrę, gruźlicę, chlamydię, kiłę, mykoplazmę, ureplasma, candida, giardię, a nawet HIV;
• są zdiagnozowani choroby autoimmunologiczne. W tym często wykorzystywane do badania hormonów tarczycy enzymo-połączony test immunoenzymatyczny: TSH, TG, T3 i T4.

Oprócz celów diagnostycznych, metoda immunoenzymatyczna jest wykorzystywana w badaniach medycznych.

W jaki sposób materiał jest brany?

W większości przypadków zaleca się pobieranie próbek krwi żylnej do analizy. Po przetworzeniu i przygotowaniu materiału do badania przeprowadza się test immunologiczny. surowica krwi lub osocze.

Badanie panelu hormonalnego wymaga szczególnej uwagi, ponieważ w tym przypadku niezwykle ważne jest, aby wziąć pod uwagę cechy przyjmowanego materiału. Na przykład, diagnoza większości żeńskich hormonów układu rozrodczego wymaga, aby krew żylna była pobierana w niektóre dni cyklu menstruacyjnego. Na szereg innych hormonów wpływają czynniki zewnętrzne: sezonowość, pora dnia, stan psychiczny pacjenta i wiele innych. Bez uwzględnienia określonych czynników można uzyskać fałszywy wynik, który doprowadzi do zaostrzenia choroby lub niewłaściwie przepisanego leczenia.

W niektórych, często skomplikowanych przypadkach, do analizy może być potrzebny płyn mózgowo-rdzeniowy, płyn szklisty lub płyn owodniowy kobiety w ciąży. Procedury gromadzenia tych materiałów biologicznych wiążą się z pewnym ryzykiem, przeciwwskazaniami i okresem powrotu do zdrowia. Dlatego powinien być przeprowadzany tylko zgodnie z zeznaniami lekarza i pod jego profesjonalnym nadzorem taki enzymatyczny test immunologiczny. Dekodowanie w tym przypadku wymaga specjalnej wiedzy medycznej i może zająć trochę czasu.

Przygotowanie do analizy

Należy wykonać test immunoenzymatyczny, stosując się do wszystkich zaleceń, ponieważ czynniki zewnętrzne wpływają na wyniki badania. Na przykład, ważne jest, aby rano pobrać krew żylną (do 11 godzin). 2 tygodnie przed planowanym pobraniem materiału należy przerwać przyjmowanie jakichkolwiek leków, zwłaszcza hormonalnych. Kilka dni przed badaniem należy powstrzymać się od spożywania alkoholu i tłustych potraw, a także wyeliminować wysiłek fizyczny, doświadczenia i stres.

Dekodowanie wyników

Dekodowanie wyników testu immunoenzymatycznego wymaga specjalnej znajomości osobliwości struktur białkowych (przeciwciał), które opisano powyżej (IgG i IgM). Zgodnie z tymi danymi analizowane są wskaźniki badawcze. Tabela opisuje opcje, które można uzyskać podczas analizy:

Analizując prezentowaną tabelę, możemy stwierdzić, że w większości przypadków wymagane będą dodatkowe badania w celu potwierdzenia diagnozy. Nie może dać jednoznacznej odpowiedzi tylko immunoenzymatycznej. Norma w tym przypadku nie ma wyraźnych granic: wykryte białka z grupy G wskazują tylko, że organizm wcześniej był zakażony określonym patogenem. Ale ten sam wynik może wskazywać na obecność ostrej fazy - ważne jest, aby porównać wiele czynników i wskaźników w celu postawienia prawidłowej diagnozy.

Czynniki ryzyka

ELISA jest w 90% dokładna. Niemniej jednak istnieją czynniki ryzyka, które wpływają na zniekształcenie wyniku diagnostycznego: nieprawidłowe działanie sprzętu, niewłaściwy odbiór materiału, jego przechowywanie i transport oraz zaniedbanie innych czynników zewnętrznych.

Nie zaleca się wykonywania diagnostyki po transfuzji krwi, hemolizie, zabiegu chirurgicznym, biopsji lub przebiciu materiału biologicznego - może to również wpływać na wyniki wskaźników.

Koszt analizy

Koszt badania diagnostycznego ma szeroki zakres i zależy od rodzaju analizy i ustalonego antygenu, ponieważ na podstawie tych czynników oblicza się koszt zestawów odczynników i określa się złożoność analizy. Jednak w większości przypadków test ELISA jest dostępny dla wielu pacjentów. Jego cena waha się od 300 p. do 2000 p.

ELISA jest niedrogą, szybką i wysoce skuteczną metodą diagnozowania dużej listy chorób. Ale tylko wykwalifikowany pracownik medyczny ma prawo zajmować się interpretacją wyników i diagnozą.